正交试验优化实现毛细管中的快速高效DNA提取
摘要：
目的 利用正交试验优化毛细管DNA提取的实验条件,并对优化后的毛细管DNA提取法进行考察.方法 结合液滴与磁珠控制方法,在聚四氟乙烯毛细管中依次完成进样、DNA结合、洗涤以及洗脱等过程,建立毛细管DNA提取法.对照方法采用传统煮沸裂解法.采用正交试验考察血液乙型肝炎病毒(HBV DNA)提取的实验条件,包括结合时间、洗脱时间与洗脱温度等对DNA提取效果的影响.考察毛细管DNA提取法的DNA提取效果与重现性,分析提取的DNA定量(Ct值)与原始样品浓度的相关性.比较毛细管DNA提取法与对照方法提取DNA定量结果及耗时.结果 正交试验提示毛细管DNA提取法的最佳实验条件为磁珠DNA结合时间5 min,洗脱温度60℃,洗脱时间1 min.荧光定量PCR显示,毛细管DNA提取法DNA提取效果较好,回收DNA定量具有良好的重现性,提取的DNA定量与原始样品浓度呈正相关(r=0.9999,P＜0.01).配对t检验显示,毛细管DNA提取法的回收DNA定量显著高于对照方法(t=-4.263,P＜0.001).采用优化的实验条件,整个毛细管DNA提取操作在23min内完成,而对照方法耗时45 min以上.结论 利用正交试验实现了毛细管DNA提取实验参数的优化,建立了一种快速、高效的DNA提取方法.
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doi：
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关键词：
实验室技术和方法
聚合酶链反应
正交试验
毛细管
DNA提取
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Keyword：
Laboratory techniques and procedures
Polymerase chain reaction
Orthogonal test
Capillary
DNA extraction
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作者：
雷秀霞
梁广铁
王维
刘紫娟
刘大渔
周小棉
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Author：
LEI Xiu-xia
LIANG Guang-tie
WANG Wei
LIU Zi-juan
LIU Da-yu
ZHOU Xiao-mian
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作者单位：
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刊名：
中华生物医学工程杂志
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Journal：
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年，卷(期)：
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所属期刊栏目：
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基金项目
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在线出版日期：
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