抽动障碍患儿T淋巴细胞亚群水平变化的分析

　　抽动障碍患儿T淋巴细胞亚群水平变化的分析

　　汪琼1，王国亮2，韩斐3，范菲3，杨振宇3(1.西安市儿童医院，陕西西安710003;2.首都医科大学附属北京儿童医院，北京

　　100045：3.中国中医科学院广安门医院，北京100053)

　　[摘要]目的：通过比较正常儿童与抽动障碍( TD)患儿T淋巴细胞亚群的差异，探究TD患儿发病及病情严重程度与T淋巴细胞亚群之间的关系，并探索TD在细胞免疫方面可能存在的发病机制。方法：采用流式细胞仪测定53例TD患儿(TD组)及30例健康体检儿童(对照组)T淋巴细胞亚群水平，并进行比较。结果：TD组CD8+水平较对照组升高，CD4+及CD4+/CD8+水平均低于对照组(P均<0. 05);CD3+水平与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。TD患儿的YGTSS评分、发病时间长短及病情严重程度与T淋巴细胞亚群水平之间均没有明显的对应关系。结论：TD患儿的发病与细胞免疫相关，且CD8+T淋巴细胞在其中起主导作用，但未见其与TD的病程长短及严重程度具有相关性。

　　[关键词]抽动障碍;T淋巴细胞亚群

　　[中图分类号] R748 [文献标识码]A [文章编号]1672-108X( 2018) 06-0001-04

　　Changes of T Lymphocyte Subsets in Tic Disorders Children Wang Qiong' , Wang Guoliang2 , Han Fej3, Fan Fej3 , Yang 2henyu3(i. Xi'an Children's Hospital, Shaanxi Xi'an710003, China; 2. Beijing Children's Hospitat, Capital Medical University, Beijing 100045, China; 3. Guang' anmen Hospital China Academy of Chirzese Medical Sciences, Beijing 100053, China)

　　[Abstract] Objective: To investigate the connection between the causes, onset time, severity of tic disorders (TD) and the T lymphocyte subsets levels of TD children, and to explore the existential pathogenesis in cellular immunity of TD through comparing the differences of T lymphocyte subsets levels of TD children with normal children. Methods: Flow cytometry was adopted to determine and compare the T lymphocyte subsets levels of TD group (n=53) and control group (n=30). Results: Compared with the control group, the CD8+ T cells level of TD group increased significantly; yet the CD4+, the CD4+/CD8+ T cells levels of TD group were lower than those of the control group ( P0.05). Meanwhile, there was no significant correspondence between the YGTSS score, onset time,severity of TD and T lymphocyte subsets levels. Conclusion: The onset time of TD children is correlated with cellular immunity, which is on the basis of the CD8+T cells' leading role, yet it has nothing to do with the onset time and the severity of TD.

　　[ Keywords] tic disorders; T lymphocyte subsets

　　抽动障碍( tic disorders.TD)主要以抽动为临床表现的一类神经精神类疾病，临床表现为一种不自主、无目的、快速、刻板的肌肉收缩，主要分为运动性和发声性两大类。近年来该病的发病率为0. 3%~0.90'/0，呈逐渐增高趋势。抽动障碍对患儿的学习、日常生活和家庭都有影响，但发病机制尚未研究清楚。近年来不少研究发现，TD患儿在细胞免疫方面存在异常，综合近几年研究结果，主要为CD4+/CD8+、CD4+降低和CD8+升高[24]。但基于TD患儿前期多有感染病史，其免疫反应是感染所致还是疾病本身特性尚不清楚，本研究为进一步探究其关系，比较了近期无感染病史的TD患儿与正常儿童的T淋巴细胞水平，以探索TD在细胞免疫方面可能存在的机制。

　　1 资料和方法

　　1.1一般资料

　　选取2014年7月至2016年1月在广安门医院儿科门诊就诊的53例TD患儿纳入TD组，其中男42例，女11例，男女比例3. 82：1;年龄(7.84 +2. 19)岁;病程1个月～5年;轻度6例，中度38例，重度9例。根据发病病程的长短将患儿分成三组：病程<1年的患儿为1年组，病程1~3年的患儿为1~3年组，病程>3年的患儿为>3年组。

　　纳入标准：(1)年龄3—16岁;(2)符合美国《精神疾病诊断与统计手册》第五版( DSM-V)中抽动障碍(TD)诊断标准。51;(3)患儿在医院就诊的6个月内没有使用过与本研究方案相关的药物;(3)患儿近期未患过呼吸系统感染;(5)脑电图没有明显特征性的异常、肝肾功能

　　基本正常的患儿;(6)入组的患儿都取得了患儿家属的同意并且签订了知情同意书。

　　美国《精神疾病诊断与统计手册》第五版( DSM-V)中抽动障碍诊断包括：(1)短暂性抽动障碍(TTD)：①一种或多种运动性抽动和(或)发声性抽动，但在病程中不同时出现;②抽动一天发作多次，几乎每天发作，持续时间至少4周，但不超过1年;③既往无慢性TD或TS病史;④18岁以前起病;⑤TD症状不是直接由某种药物(如兴奋剂)或内科疾病(如亨廷顿舞蹈病或病毒感染后脑炎)所致。(2)慢性抽动障碍(CTD)：①一种或多种运动性抽动和(或)发声性抽动，但在病程中不同时出现;②抽动一天发作多次，可每天发作或有间歇，但间歇期持续不超过3个月，病情超过1年;③18岁以前起病;④TD症状不是直接由某种药物(如兴奋剂)或内科疾病(如亨廷顿舞蹈病或病毒感染后脑炎)所致。(3) Tourette综合征(TS)：①在病程中具有多种运动性抽动及一种或多种发声性抽动，而不必在同一时间出现;②抽动可每天发作多次(通常为丛集性)或间歇发作，但间歇时间不超过3个月，抽动病程在1年以上;③抽动的部位、次数、频率、强度和复杂性随时间变化;④18岁以前起病;⑤TD症状不是直接由某种药物(如兴奋剂)或内科疾病(如亨廷顿舞蹈病或病毒感染后脑炎)所致。

　　选取北京儿童医院门诊体检的健康儿童为对照组，其中，女9例，男21例;年龄(7.26+2. 41)岁。纳入标准：(1)年龄3—16岁;(2)来院正常体检的儿童且没有抽动碍的病史;(3)肝肾功能正常;(4)来院6个月内没有使用过抗精神病药物以及免疫制剂等对研究结果有影响的药物;(5)家属均同意配合入组。两组儿童性别、年龄比较差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。

　　1.2 方法

　　1.2.1 严重程度评估 采用耶鲁综合抽动严重程度量表( YGTSS)：YGTSS评分≤25分的为轻度;25~ 50分的为中度;≥50分的为重度。

　　1.2.2 检测方法 采集两组受试者清晨空腹抗凝血2 N3mL，采用流式细胞仪测定T淋巴细胞亚群CD3+、CD4+、CD8+水平、CD4+/CD8+。

　　1.3 统计学方法

　　应用SPSS20.0统计软件，计量资料以x+s表示。两组患儿T淋巴细胞亚群比较采用f检验和非参数Mann-Whitney U检验，YGTSS评分与T淋巴细胞亚群水平的相关性分析采用Spearman双变量相关性分析，病情严重程度、病程与T淋巴细胞亚群水平的关系以及不同病程患儿间T淋巴细胞亚群水平的比较采用Kruskal-Wallis日检验。P<o. p="" 05为差异有统计学意义。

　　2结果

　　2.1 两组儿童T淋巴细胞亚群比较

　　TD组患儿CD4+、CD4+/CD8+水平较对照组低，CD8+水平较对照组高，差异有统计学意义(P均<0. 05)，CD3+水平较对照组低，但差异无统计意义(P>O. 05)。见表1。

　　2.2 TD患儿病情严重程度、病程与T淋巴细胞亚群水平的关系

　　轻、中、重度TD患儿间T淋巴细胞亚群水平比较差异均无统计学意义(P>0.05)，见表2。YGTSS评分与T淋巴细胞亚群水平间无明显相关性，见表3。

　　不同病程患儿T淋巴细胞亚群比较差异均无统计学意义(P>0. 05)，见表4。

　　表1两组儿童T淋巴细胞亚群的比较

　　组别 例数 CD3+/% CD4+/% CD8+/% CD4+/CD8+

　　表2不同病情严重程度TD患儿T淋巴细胞亚群水平比较

　　表3 TD患儿YGTSS评分与T淋巴细胞亚群水平的相关性分析

　　表4不同病程TD患儿T淋巴细胞亚群水平的比较

　　3讨论

　　抽动障碍( TD)的诊断尚没有针对性的检测指标，且发病的病理机制不明确，目前认为由多种因素综合影响导致。有不少研究发现TD与感染关系密切№驯，例如，早期有些人认为TD主要与A族B.溶血性链球菌( GAS)等的感染相关，机体对此病原体的过度免疫反应引起了本病，而随着研究的不断深入，病原逐渐增多到支原体、病毒，甚至是不常见的弓形虫等‘IO-11。而TD在感染免疫方面的机制，早是由Swedo S E等12]提出的链球菌感染相关儿童自身免疫性神经精神障碍( PANDAS)假说。在此假说之后，学者们不断地探究，发现患儿机体因为免疫应答而产生了链球菌抗体，与此同时，还生成了抗基底神经节抗体( ABGA)，这之间是通过一种叫作分子模拟的机制产生¨引，也就是在感染激活机体免疫系统的同时，因分子的相似性导致了神经系统的异常免疫反应，这种免疫反应的异常又导致了皮质一纹状体一丘脑-皮质环路( CSTC)的失常，而神经基底节又是此环路的基础，因此造成神经运动功能不能正常发挥作用，从而出现各种抽动症状。通过这些研究我们发现，TD发病和呼吸道感染关系密切，但研究所得的病原多种多样，究竟是哪种感染诱发疾病无法确定。但由此启示我们，不同病原的感染或许是通过一个共同的通路引起相同的反应而导致TD的发生。在此过程中，感染仅仅扮演了诱因的角色，而真正产生影响的是交叉免疫反应的激活。

　　本研究显示，TD患儿较正常对照组，存在着CD4+和CD8+淋巴细胞亚群的显著变化，这与近来许多相关研究结果一致[24]，尤其是CD8+淋巴细胞亚群水平较对照组显著升高，提示TD患儿存在着与自身相关的免疫紊乱。而本次研究排除了近期呼吸道感染的患儿，在这种情况下TD患儿仍存在着免疫方面的异常，由此可见，感染只是一个诱发因素，免疫反应的异常才是终导致TD发生的机制。由此推测，TD的发病机制或许是在一次不经意的感染之后触发了机体自身相关的免疫系统，而基底神经节的某些结构与一些外源性抗原存在相似的抗原性，从而出现交叉免疫反应，使机体被自身相关的免疫细胞攻击，从而损害到基底神经节。而神经基底节对运动有着不可代替的调节作用，任何一个部位损伤都将使得CSTC运动环路不能正常运作，从而出现各种不自主的抽动。临床上也发现重复感染有加重本病症状的迹象，这也同时印证了我们的推测。

　　本研究中，与正常对照组比较，TD患儿的CD8+T淋巴细胞水显著的升高。而近年来不少研究认为CD8+T细胞在对抗病毒及肿瘤等方面扮演着重要的角色，且与自身免疫性疾病关系密切。进一步分析其内在机制发现，CD8+T淋巴细胞是具有直接杀伤作用的细胞毒性T淋巴细胞，在相应抗原的多次刺激下，可发生特异性扩增引。而TD患儿CD8+T细胞水平显著高于对照组，提示TD患儿体内可能存在CD8+T淋巴细胞的异常增殖，其产生的细胞毒性可能对机体的自身成分也进行了攻击，尤其是基底神经节。基底神经节中有许多不同的神经递质发挥作用，如多巴胺、部分氨基酸、乙酰胆碱等。如果基底神经节受到损伤，就会间接的对这些递质的传递与释放产生影响，而这些递质大部分与我们的情感、认识，甚至是心理行为等密切相关，从而改变和影响TD的发生与发展。近来有不少相关文献可供我们参考，其中的观点都支持这一推论[20-22]

　　在T细胞的活化过程中，CD28、B7、CTLA4、PD-1等T细胞辅助激活受体起到了重要的作用，尤其CD8+CD28+T细胞通过排粒作用释放穿孑L素和颗粒酶、肿瘤坏死因子等细胞毒物质，以进一步发挥细胞毒作用。虽然本研究发现CD8+T淋巴细胞亚群水平在TD患儿显著升高，但进一步与疾病严重程度以及病程的相关性分析未获得显著性结果。这一方面可能是本研究的样本量较小，另一方面，CD8+T淋巴细胞各亚群间可能发生了不同的变化，使临床相关性分析产生了偏倚。为了更深入地了解CD8+T淋巴细胞升高对TD产生影响的通路、介质，进一步分析CD8+T淋巴细胞亚群、肿瘤坏死因子等细胞因子的变化以及与TD发病的关系将是一项很有意义的工作。

　　参考文献

　　[1]SCHARF J M, MILLER L L,GAUVIN C A, et.Population prevalence of Tourette syndrome:a systematic review and Meta-analysis[J].Mov Disord, 2015, 30(2):221-228.

　　[2]刘张，季金萍，陈虹，等.Tourette综合征儿童T淋巴细胞亚群与情绪的相关性研究[J].中国现代医学杂志，2013，23( 27)：101-105.

　　[3]朱鹏程，吴敏，倪建俐，等.抽动障碍患儿实验室检查及其诊断意义的分析[J].现代生物医学进展，2016，16( 19)：3661-3664.

　　[4]陈江鱼，赵宏伊，李杰，等.儿童抽动障碍与病原微生物感染及其免疫的相关性[J].实用儿科临床杂志，2012，27( 19)：1536-1537.

　　[5]美国精神病医学学会，精神障碍诊断与统计手册(第五版)[M].张道龙，等译.北京：北京大学出版社，2014: 34-35.

　　[6]于鹏，于川川.小儿抽动障碍与A族溶血性链球菌感染的相关性研究[J].中国现代药物应用，2016，10(12)：180-181.

　　[7]李宁，杜建军，郑华.抽动秽语综合征和ASO .IL-6及IL-8水平关系研究[J].中国儿童保健杂志，2013, 21(7)：688-690.

　　[8]李敬衡，链球菌感染与小儿抽动症的关系研究[J].吉林医学，2014, 35( 13):2831-2832.

　　[9]MARTINO D, ZIS P,BUTrIGLIONE M. The role of immune mechanisms in Tourette syndrome [Jl. Brain Res, 2014,5(15)：14.

　　[10]程德君，张桂艳，王娟，等，儿童抽动障碍患儿病毒与细菌感染血清中IL-6和TNF-a水平变化的分析[J].中华医院感染学杂志，2016, 26(17)：40704072.

　　[11]原慧芳，阮秀花，儿童抽动症与弓形虫感染相关性[J].河南预防医学杂志，2013, 24(2)：85-86.

　　[12]SWEDO S E, LEONARD H L,GARVEY M, et al.Pediatric autoimmune neuropsychiatric disorders associated with streptococcal infections: clinical description of the first 50 cases[J]. Am J Psychiatry, 1998, 155: 264-271.

　　[13]DAVIDE M, FLAVIA C,MAURA B, et al.The relationship between group a streptococcal infections and Tourette syndrome:a study on a large service-based cohort [J]. Dev Med Child Neurol, 2011, 53(10): 951-957.

　　[14]RAMIREZ M F,AI D, BAUER M, et al. Innate immune function after breast, lung and colorectal cancer surgery[ J].J Surg Res, 2015, 194(1): 185-193.

　　[15lYANC M, CHEN T,LI X, et al.K33-linked polyubiquitination of 2ap70 by Nrdpl controls CD8+T cell activation[Jl. Nat Immunol, 2015, 16 (12): 1253-1262.

　　[16]PETRELLI A, VAN WIJK F. CD8'T cells in human autoimmune arthritis: the unusual suspects [Jl. Nat Rev Rheumatol, 2016, 12(7): 421-428.

　　[17]PtREZ-VIGIL A, FERNANDEZ DE LA CRUZ L,Brander G, et al- The link between autoirnmune diseases and obsessive-compulsive and tic disorders:a systematic review[J].Neurosci Biobehav Rev, 2016, 71: 542-562.

　　[18]王云飞，王艺，王春荣，等.CD3/CD28免疫磁珠法体外扩增外周血T淋巴细胞[J].细胞与分子免疫学杂志，2014, 30(10)：1090-1092.

　　[19]SCHNEIDER-HOHENDORF T,MOHAN H, BIEN C G,et al. CD8+ T-cell pathogenicity in Rasmussen encephalitis elucidated by large-scale T-cell receptor sequencing[ Jl. Nat Commun,2016，7：11153.

　　[20]于文静，白雪，张雯，等.健脾止动汤对多发性抽动症患儿神经递质的影响[J].中华中医药杂志，2015, 30(5)：1757-1761.

　　[21]邹英杰，王骥超，李志飞，全蝎蜈蚣对抽动症模型小鼠行为及单胺类神经递质的影响[J].中华中医药学刊，2016，34(2): 434 437.

　　[22]李小萍，李杏色，李进华，等，抽动障碍儿童单胺类神经递质和血锌、钙水平分析[J].河北医科大学学报，2014，35(6)：704-706.