如何写好基金申请书中的立项依据

　　我是个参与科研时间不算太长的医生，写过基金申请书，所以想跟大家分享一下自己的一些感想吧。想要写好基金申请书中立项依据，不光光要看，也是需要强加联系的。下面就跟大家分享一下一些关于立项依据写作的干货和一些点评。

　　一、明了写立项依据是为了什么

　　要做什么，为什么做，怎样做，由这三步展开。

　　1. 做什么，就是项目的科学问题及其相应的、需要验证的科学假说。

　　2. 为什么做，指的是通过研究动态的分析并结合自己的前期研究论证科学问题和科学假说;

　　3. 怎么做，即为验证科学假说、解决科学问题而提出来的研究思路

　　写立项依据就是要揭示项目的科学问题的必要性和重要性，阐述项目的研究假说的理论基础和实验依据，论述验证科学假说的研究思路。其实说这么多可能还是很多的新手认为假大空的理论还是不能让我写好立项依据。下面再给大家介绍一下立项依据的构成要素后，就给大家看看好的范例，和一些点评。

　　“立项依据”构成的五个要素：科学问题、研究假说、预实验、研究思路和文献。

　　二、立项依据范例以及点评

　　国家自然科学基金资助项目( 30672161)

　　垂体腺瘤是一种常见的颅内肿瘤，约占颅内肿瘤总发病率的10%-15%，垂体生长激素(growth hormone, GH)腺瘤是垂体腺瘤中一种特殊类型，生长快、侵袭性强，主要表现为GH分泌过多引起的内分泌异常症状，难于治疗[1];多年来，对其发病机制和内分泌学的研究一直是GH腺瘤研究的重点。

　　点评：毫无疑问，仅看第一段该标书中标的可能就非常大，至少是职业级的写手了，一句话交待清楚几乎所有的研究背景，但没有提及耐药。

　　正常垂体GH的分泌受生长激素释放激素(growth hormone releasing hormone, GHRH)和生长抑素(Somatostatin, SS)双重调控。二者通过激活各自受体，调控腺苷酸环化酶活性，调节细胞内第二信使cAMP和蛋白激酶A(PKA)水平，促进或抑制生长激素分泌。以上二种调节途经称为GH分泌的经典调节途径。1989年，Landis CA等首先在欧洲发现约有40%的垂体GH腺瘤患者存在gsp癌基因。该癌基因可以刺激G蛋白和腺苷酸环化酶持续激活，导致cAMP异常增多，引起GH过度分泌[2]; 生长抑素类似物对改善部分垂体GH腺瘤患者的临床症状有明显效果，但部分耐药病例也提示，人垂体GH腺瘤可能存在更为复杂的GH分泌调控机制。

　　近年来，另一 调节人垂体GH的途径—“GHS/Ghrelin--GHS-R途径”被人们发现。生长激素释放剂受体(growth hormone secretagogue receptor, GHS-R)是一种由366个氨基酸组成的G蛋白偶联受体，通过与其配体GHS/Ghrelin结合参与脉冲性GH释放调节[3]。GHS-R在多种组织中均有表达，在神经系统中垂体前叶和下丘脑表达高;在垂体腺瘤中生长激素(growth hormone, GH)和促肾上腺皮质激素(adrenocorticotrophic hormone, ACTH)腺瘤表达特异性增高。研究发现，GH腺瘤中，GHS-R mRNA表达高出正常垂体200倍[4]。该系统和经典的GHRH/SS调控途径不同，GHS-R是通过PLC-IP3/DAG-PKC双信号通路发挥作用，该信号通路对GHRH的促GH分泌有协同作用[5]，这种作用可能是导致人GH腺瘤对单一治疗药物产生耐药性的重要原因。

　　点评：这两段阐释的耐药与GH分泌调控机制进展，对于初学者来说，可以集中进行详细回顾，但要注意条理清晰。

　　我们在对GH腺瘤中GHS-R信号传导的研究(国家自然科学基金资助课题，No.39670736)中发现，①国人的gsp癌基因表达为40%(和欧洲人种的发病率相同)，无法解释其他60%的GH腺瘤的发病机制;GHS/Ghrelin--GHS-R途径则可能是对gsp癌基因理论的补充;②GHRH/SS下游的PKA通路和GHS-R下游的PKC通路对GH激素分泌及信号传导存在协同作用 ;③Ghrelin和GHS-R在人垂体GH腺瘤中特异性过度表达，可能通过自/旁分泌机制参与GH腺瘤生长及GH分泌的调控，可作为判断GH腺瘤侵袭性及预后标志之一。④垂体GH腺瘤中可能存在GHS-R所固有的负反馈机制——“脱敏”机制的减弱，且与肿瘤发病机制有关[6]。

　　点评：这应是标书中标的加分点之一了，自然基金对于具有延续性的课题，还是乐于资助的。

　　前期研究中，发现PKA通路和PKC通路在GH腺瘤GH分泌及信号传导中存在协同作用;但两者间的信号传导机制尚不明确，在GH腺瘤中确定两者发生信号传导的下游分子，检测出其间作用的中间蛋白或非蛋白分子;不仅可通过深化GHS-R信号传导机制的研究扩大对GHS-R作用机制和GH腺瘤发病机制的认识，为垂体GH腺瘤的联合药物治疗提供理论依据;而且因普遍认为PKA通路作用于肿瘤的早期阶段，PKC通路和肿瘤的侵袭性有关，所以对研究非侵袭性和侵袭性肿瘤间的关系有一定意义。

　　点评：PKA通路和PKC通路之间的中间蛋白筛选，似乎是三个蛋白间的相互作用了，如果做三杂交筛选，再加验证的话，工作量也是足够大的了，如果在此基础上，再做功能验证的话，一本标书也足够了。但是申请者并没有满足于此，或在此嘎然而止。原因个人推测申请者也清楚单纯的筛选很难获得资助，因为评委一句话就可以否定整份标书：如果筛选不到阳性相互作用蛋白呢?因此，对于初学者来说，要仔细体会申请者的策略。

　　在进一步的对GHS-R在GH腺瘤的作用机制研究中我们拟选择GHS-R基因启动子干预的方法。目的基因的启动子干预是当前研究肿瘤基因表达调控的一个新方向;确定该基因启动子关键的调节序列和与之结合的转录因子(transcription factor, TF)不仅是该领域研究的前提，而且对一些疾病的病因和发病机制的研究也有帮助。在此基础上设计的以转录因子为治疗靶点的分子化合物中，当前以TF decoy寡核苷酸(decoy-ODNs)策略较为优越和先进，通过靶向性竞争俘获活化的转录因子，从目的基因表达的调控区对启动子的活性进行调节，从而达到研究和体外实验性治疗的目的[7]。

　　初步对GHS-R启动子的研究表明，人GHS-R基因的5’-端侧翼区虽没有典型的TATA盒序列，但在-215--237间存在其高度近似区。该区间上游有多个可能的转录因子结合位点，其中包括Pit-1、PEA-3等[8]。通过荧光素酶测定转染含有不同长度5’-端片段的大鼠GH3和GH4细胞中的启动子活性，发现了一些可能的正性调控区(enhancer region)和负性调控区(repressor region);但缺乏在人类正常细胞和肿瘤细胞中的证实。

　　点评：这部分研究与上一部分的筛选似乎是并行的，但是筛选的时候目的点更强。

　　本项目拟采集临床标本，原代培养GH腺瘤细胞和垂体前叶细胞，采用对多种细胞内第二信使的分别激活或抑制手段，检测细胞内部的信号改变和垂体GH腺瘤的激素分泌和生长特性变化，确定PKA和PKC传导通路间发生信号传导的下游分子;自行构建来源于原代细胞的cDNA文库，运用改良的酵母双杂交系统和三杂交系统筛选和证实两者间作用的中间蛋白或其他小分子，并评估推论。同时，应用DNA迁移测定(DNA Mobility Shift assay)、DNA足迹技术(DNA footprinting)确定GHS-R基因启动子正性调控序列和相应的转录因子，通过decoy 策略抑制启动子活性，从而下调GHS-R的表达，进行通路活性和内分泌功能检测，进一步研究GHS-R在GH腺瘤中的作用机制;并对相应的TF验证、对比、综合、筛选，为以后的治疗研究提供参考和方法。

　　点评：两个平行的筛选实验，但是结果和意义上没有提及交叉，如GHS-R的表达变化对PKA和PKC通路中筛选出的分子有何影响没有提及。

　　本课题实施的意义在于：1. 以GH腺瘤为研究对象探索PKA和PKC通路间的相互作用; 2.丰富和深化GHS-R基因的转录调控理论;3.进一步探讨GHS-R的作用机制;4. 尝试针对GHS-R基因启动子的实验治疗研究。

　　参考文献

　　1. Asthagiri A, Lopes MB. Neuropathological considerations of pituitary adenomas. Front Horm Res, 2006, 34 : 206-235.

　　2. Asa SL, Ezzat S. Genetics and proteomics of pituitary tumors. Endocrine, 2005, 28 (1) : 43-47.

　　3. Simith RG. Development of growth hormone secretagogues. Endocr Rev, 2005, 26 (3) : 346-360.

　　4. Volante M, Allia E, Gugliotta P, Funaro A, Broglio F, Deghenghi R, Muccioli G, Ghigo E, Papotti M. Expression of ghrelin and of the GH secretagogue receptor by pancreatic islet cells and related endocrine tumors. J Clin Endocrinol Metab, 2002, 87 (3) : 1300-1308.

　　5. Kamegai J, Tamura H, Shimizu T, Ishii S, Tatsuguchi A, Sugihara H, Oikawa S, Kineman RD. The role of pituitary ghrelin in growth hormone (GH) secretion: GH-releasinghormone-dependent regulation of pituitary ghrelin gene expression and peptide content. Endocrinology, 2004, 145: 3731-3738.

　　6. 张华楸, 王雄伟, 范月超, 王和平, 叶飞, 雷霆. “交叉通讯”在人垂体生长激素腺瘤激素分泌中的调控作用研究. 微循环学杂志, 2005, 15 (2) : 11-14.

　　7. Ahn JD, Kim CH, Magae J, Kim YH, Kim HJ, Park KK, Hong S, Park KG, Lee IK, Chang YC. E2F decoy oligodeoxynucleotides effectively inhibit growth of human tumor cells. Biochem Biophys Res Commun, 2003, 310 (4) : 1048-1153.

　　8. Yeung CM, Chan CB, Cheng CH. Isolation and characterization of the 5'-flanking region of the growth hormone secretagogue receptor gene from black seabream Acanthopagrus schlegeli. Mol Cell Endocrinol, 2004, 223 (1-2) : 5-15.

　　总体评价：

　　毫无疑问，对于自然基金申请来说，这份标书写作是成功的。

　　1. 写法上非常凝炼;

　　2. 原有工作上的继续深入;

　　3. 新技术和新研究策略对临床的应用非常有利。许多专家不能理解它们，但他们不能理解它们，而且很难随意发表评论。否则，他们的水平就会很差，通过的几率也会很高。但是，对于初学者来说，一定要注意，这是老手写的，有这样两部分并行的方法，可能不适合初学者强行模仿，一般来说，一个基金可以解决一个问题。另外，如果要完成标书的内容，工作量会比较大。

　　推荐阅读：

　　《国家自然科学基金立项依据详细解析》

　　以上就是关于立项依据的总结和一些分享了，也许自己分享的内容还不太完整或者浅显，大佬们也可以来点评和分享一些独特的看法、经验。